MeWo细胞（人恶性黑色素瘤细胞）

MeWo细胞（人恶性黑色素瘤细胞系）是一种来源于一名78岁白人男性患者皮肤的恶性黑色素瘤细胞系，具体提取自其转移至淋巴结的肿瘤组织。MeWo细胞由Y. Kodera和M. Bean于1974年建立，展现出成纤维细胞样形态，具有显著的增殖和侵袭能力，适合在体外培养。由于MeWo细胞源于真实的恶性黑色素瘤病例，因此在癌症生物学、药物筛选及毒理学研究中具有重要应用价值，成为深入理解黑色素瘤病理过程及开发新疗法的重要工具。

MeWo细胞特性特征

• 抗原表达:血型: A型血

• HLA抗原: HLA A2、A26、Bw16、Bw18

• 基因表达:表达与A型血相关的基因。

• HLA基因：A2、A26、Bw16和Bw18。

• 同工酶特征：ACP1: B型；AK-1: 1型；ES-D: 1型；G6PD: B型；GLO-I: 2型；PGM1: 1-2型；PGM3: 1型

• 致瘤性: MeWo细胞在裸鼠体内形成肿瘤

MeWo细胞参数表

MeWo人恶性黑色素瘤细胞培养教程

收货处理

• 观察细胞状态: 收到MeWo细胞后，检查培养瓶是否完好，培养液是否漏液或浑浊，冻存管是否完整。

• 消毒处理: 用75%酒精对培养瓶表面进行消毒处理。

• 稳定状态: 将T-25培养瓶置于37℃培养箱中静置2-4小时，以便稳定MeWo细胞状态。

MeWo细胞复苏

• 使用基础培养基（如MEM）+10%胎牛血清+1%抗生素（双抗）。
  

• 从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的MeWo细胞，放入37℃水浴中迅速摇晃解冻（约1分钟）。
  

• 将解冻的MeWo细胞与预热的完全培养基（5 mL）混合，转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5分钟。
  

• 吸弃上清，得到MeWo细胞沉淀，用2 mL完全培养基轻轻重悬细胞。
  

• 将重悬的MeWo细胞加入到T-25培养瓶中，做好标记，放入37℃、5% CO₂的培养箱中进行培养。
  

• 24小时后观察MeWo细胞的贴壁情况，吸弃旧培养基，加入新鲜预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。
  

MeWo细胞传代

• 当MeWo细胞生长至80%-90%汇合度时进行传代。
  

• 吸弃旧的培养基，加入1 mL无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清。
  

• 加入1 mL 0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），在37℃培养箱中消化1-2分钟。观察至细胞皱缩变圆后终止消化。
  

• 加入1 mL含FBS的完全培养基终止消化，轻轻拍打使MeWo细胞脱落成单个细胞悬液。
  

• 收集悬液于15 mL离心管中，1000 rpm离心5分钟。
  

• 收集MeWo细胞沉淀，用完全培养基重悬，一分为二（可根据生长速度调整比例），分别加入到新的培养瓶中，做好标记，放入37℃、5% CO₂的培养箱中继续培养。
  

MeWo细胞冻存

• 按照传代方法消化收集MeWo细胞沉淀，并取少量用于计数。
  

• 用预冷的冻存液（90%完全培养基 + 10% DMSO）重悬MeWo细胞，加入到1.2 mL冻存管中，密度为1×10⁶个/mL。
  

• 将冻存管放入程序冻存盒，在-80℃过夜后转入液氮长期保存。
  

注意事项

• 在整个操作过程中应保持无菌环境。

• 遇到任何异常情况（如运输损坏、温度波动等），应及时记录并联系供应商。

• 确保所有试剂和材料均为无菌，并在使用前进行适当预热。

常见问题及解决方案

• MeWo细胞分化

• 问题: 在传代3-4代后，MeWo细胞可能出现分化，变大并贴壁紧密，呈现“摊鸡蛋”样。

• 解决方案: 确保使用高质量的培养基和血清，定期更换培养基以维持细胞活性。

  
  

• MeWo细胞形态改变

• 问题: 复苏或传代后，MeWo细胞可能呈圆形或近圆形，短小突触消失。

• 解决方案: 观察细胞贴壁状态，适当调整培养条件，确保MeWo细胞在适宜的环境中生长。

  
  

• 消化不完全

• 问题: 使用胰酶消化时，经验不足可能导致MeWo细胞形态改变或难以消化。

• 解决方案: 控制消化时间，避免过度消化；可以尝试使用HEPES缓冲液调整pH值以改善消化效果。

  
  

• MeWo细胞脱落困难

• 问题: 更换新鲜培养基后，MeWo细胞难以从培养瓶壁上脱落。

• 解决方案: 在更换培养基前先用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞；如果密度较大，可以直接在原培养基中滴加HEPES缓冲液使pH变酸，再进行吹打。

  
  

• MeWo细胞死亡或碎片

• 问题: 运输过程中温度变化或剧烈碰撞可能导致部分MeWo细胞死亡或形成碎片。

• 解决方案: 收到MeWo细胞后应立即复苏并观察状态；如发现异常及时联系供应商。

  
  

• 支原体污染

• 问题: 长期使用抗生素可能掩盖支原体感染。

• 解决方案: 定期检测支原体，并尽量减少抗生素的常规使用，以保持MeWo细胞的健康状态。

  
  

• 培养基质量

• 问题: 培养基或血清的质量不佳会影响MeWo细胞的生长。

• 解决方案: 选择经过验证的高质量培养基和血清，并注意不同批次之间的差异。

  
  

• 冻存和复苏问题

• 问题: 冻存后复苏时MeWo细胞活性低。

• 解决方案: 确保冻存液配方正确，并严格按照冻存和复苏步骤操作；尽量缩短冻存管在-80℃中的时间，以减少对MeWo细胞的损伤。