SK-MEL-5细胞（人皮肤恶性黑色素瘤细胞）

SK-MEL-5细胞系来源于一名24岁白人女性的恶性黑色素瘤皮肤组织。SK-MEL-5细胞系由T. Takahashi及其团队成功分离，并在黑色素瘤研究中被广泛应用。尤其在转染实验以及黑色素瘤患者的特异性抗体检测中，SK-MEL-5细胞表现出重要的研究价值。

SK-MEL-5细胞染色体核型为超五倍体，模态数为120，染色体数在95至133之间波动。在9%的细胞中观察到120条染色体。大部分细胞的染色体数目集中在114到123之间。SK-MEL-5细胞系的常见标记染色体包括9q+（每细胞4个拷贝）、t(1q;8q)和del(5)(q34)（每细胞3个拷贝），以及14q+（每细胞2个拷贝）。虽然部分染色体仅以单拷贝形式存在，但较为罕见。此外，大多数细胞具有三条正常的X染色体，同时缺失N9染色体，N7和N20染色体每细胞存在7至8个拷贝。

SK-MEL-5细胞特性特征

• 致瘤性：在裸小鼠中能够形成恶性黑色素瘤，并且可转移至腋窝淋巴结。

• 基因突变：表达突变的B-Raf（V600E）和野生型N-Ras，这些特征在黑色素瘤中常见。

• 抗原表达：O型血；Rh+；HLA A2、A11、B40、Bw16等。

• 表达多种同工酶，包括：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，1-2；PGM1，1-2

SK-MEL-5细胞参数表

SK-MEL-5人皮肤恶性黑色素瘤细胞培养教程

SK-MEL-5细胞复苏

• 将水浴锅预热至37℃，为解冻SK-MEL-5细胞做好准备。
  

• 配制完全培养基（DMEM培养基，添加10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素溶液）。

• 从液氮中取出冻存的SK-MEL-5细胞，迅速置于37℃的水浴中，轻轻摇动冻存管，加速解冻，确保1-2分钟内完全融化。
  

• 注意：解冻过程中避免细胞在水浴中停留时间过长，以免损害SK-MEL-5细胞活性。

• 解冻后，将SK-MEL-5细胞悬液转移至离心管中，加入4 mL预热的完全培养基，轻轻混匀。
  

• 在1000 rpm离心3分钟，弃去上清液。

• 加入1-2 mL新鲜完全培养基，轻轻吹打SK-MEL-5细胞，确保充分重悬。
  

• 将细胞悬液转移至T25培养瓶或6 cm培养皿，加入适量完全培养基，并放入37℃、5% CO₂培养箱中培养。

• 复苏后的SK-MEL-5细胞通常需要24小时适应环境。第二天观察细胞状态并更换培养基，去除死亡细胞和残留的DMSO。

SK-MEL-5细胞传代

• 当SK-MEL-5细胞生长达到80%-90%汇合时，需要进行传代操作。
  

• 传代前准备新鲜的完全培养基和新的培养瓶。

• 用无钙、无镁的PBS清洗SK-MEL-5细胞1-2次，去除残留的培养基。
  

• 加入1 mL胰蛋白酶（0.25%胰蛋白酶+0.53 mM EDTA溶液），确保覆盖所有SK-MEL-5细胞。

• 将培养瓶置于37℃培养箱中，观察1-2分钟，直至细胞变圆并开始脱落。

• 当大部分SK-MEL-5细胞脱落时，立即加入2-3 mL完全培养基中和胰蛋白酶的作用。
  

• 将细胞轻轻吹打后，转移至离心管中，在1000 rpm下离心5分钟，弃去上清液。

• SK-MEL-5细胞重悬于适量的完全培养基中，根据需要按1:2或1:3的比例分配到新的培养瓶中。
  

• 放入37℃、5% CO₂培养箱中继续培养，定期观察SK-MEL-5细胞的生长状态。

SK-MEL-5细胞冻存

• 选择SK-MEL-5细胞生长状态良好的时间点进行冻存。配制无血清的细胞冻存液（90% FBS + 10% DMSO）。
  

• 按照传代步骤消化并收集SK-MEL-5细胞。离心后弃去上清液，并用PBS洗涤细胞1次。
  

• 使用血球计数板或自动计数仪计数，确保SK-MEL-5细胞密度为5×10^6至1×10^7 cells/mL。
  

• 依据计数结果，将细胞重悬于无血清冻存液中。

• 将1 mL SK-MEL-5细胞悬液分装至冻存管，标记清晰。
  

• 将冻存管置于-80℃冰箱中保存24小时，随后转移至液氮中长期保存。