SK-MEL-28细胞（人恶性黑色素瘤细胞）

SK-MEL-28细胞是一种人类恶性黑色素瘤细胞系，源自一名51岁男性患者的皮肤组织中的黑素细胞。
SK-MEL-28细胞系是一种亚四倍体人类细胞系，模态染色体数为90，存在于50%的细胞中，倍性较高的细胞比例为3.6%。
SK-MEL-28细胞系具有非常复杂的核型，大多数细胞共有18条或更多标记染色体。特定染色体异常包括der(1)t(1;2)(p36.1;q21)、del(1)(q2101)等，每个细胞有两个拷贝；t(2p14q)、t(3q7p)等，每个细胞只有一个拷贝。Y/常染色体易位标记der(20)t(Y;20)(q11.23;q13.3)每个细胞有两个拷贝。每个细胞有两条正常的X染色体，正常的Y染色体、N1和N11缺失，N19每个细胞有五个或更多拷贝。

SK-MEL-28细胞特性特征

• 致瘤性：SKMEL28细胞能够在裸鼠体内形成恶性黑色素瘤（大圆细胞型）。
  

• 抗原表达：A型血；Rh+；HLA A11、A26、B40、DRw4。

• 同工酶：AK-1，1-2；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；PGM1，1；PGM3，1。

• 基因特征：SKMEL28细胞表达突变型B-Raf (V600E)和野生型N-Ras。

• SK-MEL-28细胞系具有轻度色素沉着特性，保留了原发肿瘤的许多特征。
  

SK-MEL-28细胞参数表

SK-MEL-28人恶性黑色素瘤细胞培养教程

SK-MEL-28细胞复苏

• 将冻存管在37°C水浴中快速解冻。

• 加入4 mL预热的完全培养基，轻轻混合均匀。

• 1000 rpm离心3分钟，弃去上清液。

• 重悬SK-MEL-28细胞于1-2 mL新鲜培养基中。

• 将细胞悬液转移至培养皿或培养瓶中。

• 添加适量培养基，置于培养箱中培养。

SK-MEL-28细胞传代

• 当SK-MEL-28细胞密度达到80%-90%时进行传代。

• 用PBS轻柔清洗细胞1-2次。

• 加入1 mL 0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA消化液。

• 37°C孵育1-2分钟，观察细胞脱落情况。

• 加入2-3 mL完全培养基终止消化。

• 1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 用1-2 mL新鲜培养基重悬SK-MEL-28细胞。

• 按1:2或1:3比例接种到新的培养容器中。

• 每周传代2-3次。

SK-MEL-28细胞冻存

• 使用无血清冻存液或含5% DMSO + 20% FBS的基础培养基。

• 将SK-MEL-28细胞悬液以1×10^6 cells/mL的密度分装到冻存管中。

• 使用程序降温或-80°C冰箱缓慢降温。

• 24小时后转移到液氮中长期保存。

传代比例调整建议

• 标准传代比例：SK-MEL-28细胞的标准传代比例通常为1:2至1:3，每周传代2-3次，这一比例适合大多数情况。

• 提高细胞生长速度：可尝试将传代比例调整为1:3至1:4，以提供更多生长空间。需要密切观察SK-MEL-28细胞的状态。

• 灵活调整：根据SK-MEL-28细胞的生长情况调整传代频率和比例。细胞生长快时，增加传代频率或扩大比例；生长慢时，减少频率或缩小比例。

• 首次传代建议：使用1:2比例进行SK-MEL-28细胞的首次传代，根据细胞适应情况逐步调整。

培养条件优化建议

• 培养基选择：除了EMEM或MEM基础培养基，还可以考虑使用专门为SK-MEL-28细胞优化的培养基，如ZM0997，以提高细胞活性。

• 培养环境：确保培养箱内温度保持在37°C，气相条件稳定在95%空气 + 5%二氧化碳。

• pH值维持：pH值保持在7.2-7.4，定期检查并调整。

• 细胞密度控制：SK-MEL-28细胞在密度达80%-90%时进行传代，避免过度汇合或过于稀疏。

• 换液频率：根据SK-MEL-28细胞的生长速度和代谢情况，适当增加换液频率，以保持培养基新鲜。

• 添加生长因子：考虑在培养基中添加特定生长因子或营养补充剂，以促进SK-MEL-28细胞的生长和活性。

• 减少应激：在操作过程中，尽量减少SK-MEL-28细胞受到的机械和化学应激，如控制消化时间，轻柔操作等。