MNT-1细胞（人黑色素瘤细胞系）提供str位点

MNT-1人黑色素瘤细胞系（MNT-1 human melanoma cell line，RRID: CVCL_5624）是一种来源于人黑色素瘤淋巴结转移病灶的肿瘤细胞系，具有贴壁生长和高度色素化的典型特征。MNT-1细胞并非来源于正常皮肤黑素细胞，也不属于淋巴结中的淋巴细胞，而是具有黑色素生成能力的人源黑色素瘤细胞。根据 Cellosaurus 的记录，MNT-1细胞与 MNT-3细胞来源于同一供者，但二者属于不同的细胞系，在实验使用和细胞鉴定时应加以区分。

MNT-1细胞的历史来源，早期相关研究可追溯至 Nisticò 等于1990年发表的论文，以及 Cuomo 等于 1991 年发表的研究。2001 年，Raposo 等人在相关研究中记载，其实验所使用的 MNT-1 细胞由美国国家癌症研究所（NCI/NIH）的 V. Hearing 提供。目前，MNT-1细胞由美国典型培养物保藏中心（ATCC）收录，保藏编号为 CRL-3450。

MNT-1细胞属于恶性黑色素瘤来源的肿瘤细胞系，其增殖特性、信号通路及基因表达背景与正常人体黑素细胞存在明显差异。因此，在黑色素生成调控、色素沉积机制及候选美白成分筛选等研究中，MNT-1细胞可作为具有代表性的高色素细胞模型，用于初步观察处理因素对黑色素生成、细胞内色素积累及相关分子通路的影响，但不能将其实验结果直接等同于正常人体皮肤中的生理反应。尤其是在涉及皮肤色素调节、黑素细胞生理功能及化妆品功效评价时，应充分考虑其肿瘤来源所带来的模型局限性，必要时结合正常人原代黑素细胞或其他更接近人体皮肤生理环境的实验模型进行验证。

MNT-1细胞特性特征

• 高色素性：MNT-1细胞具有明显的黑色素生成能力，是研究人源黑色素合成与色素调控的经典黑色素瘤模型。

• 黑素体成熟阶段完整：MNT-1细胞内可观察到Ⅰ—Ⅳ期黑素体，覆盖早期囊泡形成、纤维基质组装、黑色素沉积及高度色素化过程。

• MITF 表达：MNT-1细胞可检测到色素相关转录因子 MITF 的 mRNA 和蛋白，适合研究 MITF 与下游色素生成基因的调控关系；表达不等于基因扩增。

• TYR 表达及酶活性：表达酪氨酸酶 TYR，并具有相应酶活性；其含量、加工状态和细胞器定位与黑色素生成功能相关。

• TYRP1 与 DCT 表达：表达 TYRP1/TRP-1 和 DCT/TYRP2/TRP-2；其中 DCT 的蛋白加工状态及所在黑素体阶段与酶活性相关。

• PMEL/gp100 加工与纤维形成：表达 PMEL，又称 PMEL17/gp100；其蛋白水解加工产物参与黑素体内部纤维基质形成，是研究黑素体结构发生的重要分子。

• HMB45 反应性：HMB45 可识别加工后的 PMEL/gp100 相关表位，并标记Ⅱ期黑素体纤维基质；HMB45 是抗体名称，不是基因名称。

• MLANA/MART-1 表达：可检测到 MLANA 编码的 Melan-A/MART-1 蛋白。

• 黑素体蛋白分选特点：PMEL、TYR、TYRP1 等具有不同的加工和亚细胞定位模式，适合研究蛋白运输与黑素体成熟；总蛋白量不能替代定位或功能指标。

• RAB38 相关运输：RAB38 与 TYRP1 在核周及细胞周边存在共定位，支持MNT-1细胞用于研究黑素体相关蛋白运输。

• BRAF 突变背景：原始研究将MNT-1细胞纳入 BRAF 突变黑色素瘤细胞面板，并报道亲本对达拉非尼敏感；具体突变位点不能仅凭药物反应推定，亲本也应与耐药衍生株区分。

• TPC2 相关功能：敲除 TPCN2 编码的 TPC2 后，MNT-1细胞黑色素含量增加，增殖、迁移和侵袭降低；这是基因敲除后的表型，不是亲本天然缺失该基因。

MNT-1细胞（人黑色素瘤细胞系）参数表

MNT-1细胞（人黑色素瘤细胞系）培养教程

MNT-1细胞复苏

• 提前配制 MNT-1细胞专用完全培养基，并预热至适宜温度。

• 准备离心管，加入9 mL完全培养基。

• 准备适宜的培养容器，加入适量完全培养基，放入37℃、5% CO₂培养箱预平衡至少15分钟。

• 确保培养基pH维持在7.0～7.6范围内，避免培养基过度碱化。

• 从液氮中取出 MNT-1细胞冻存管，立即放入37℃水浴中快速解冻。

• 轻柔晃动冻存管，使细胞快速融化，参考解冻时间约为2分钟。

• 待冻存液基本融化后立即取出，避免长时间水浴。

• 使用70%乙醇擦拭冻存管外壁，在无菌操作台内开盖。

• 将解冻后的 MNT-1细胞悬液转移至预先准备的9 mL完全培养基中。

• 以125 × g离心5～7分钟。

• 离心结束后，小心弃去上清液，避免吸走细胞沉淀。

• 加入适量新鲜完全培养基，轻柔吹打，使 MNT-1细胞充分重悬。

• 将 MNT-1细胞悬液接种至预先准备好的培养容器中。

• 推荐建立培养参考接种密度为6.0×10⁴～8.0×10⁴个活细胞/cm²。

• 轻轻摇匀培养容器，使细胞均匀分布。

• 放入37℃、5% CO₂培养箱中进行恢复培养。

• 后续根据细胞生长状态，每周换液2～3次。

MNT-1细胞传代

• MNT-1细胞属于贴壁生长细胞，常规传代采用胰酶消化法。以下以T75培养瓶为例。

• 在倒置显微镜下观察 MNT-1细胞生长状态。

• 吸除培养瓶内原有培养基。

• 加入适量0.25% Trypsin-EDTA（含0.53 mM EDTA）溶液，短暂润洗细胞表面。

• 吸除润洗液，准备进行细胞消化。

• 向T75培养瓶中加入2～3 mL 0.25% Trypsin-EDTA消化液。

• 轻轻覆盖整个细胞生长表面，使消化液与细胞充分接触。

• 在倒置显微镜下观察 MNT-1细胞脱落情况。

• 一般消化时间为5～15分钟，具体以细胞实际脱离状态为准。

• 如细胞脱落较慢，可将培养瓶置于37℃环境中促进消化。

• 加入6～8 mL MNT-1细胞完全培养基终止消化。

• 使用移液管轻柔吹打细胞，使脱落细胞形成均匀悬液。

• 将细胞悬液收集至无菌离心管中。

• 根据细胞数量和培养需求，将细胞悬液分配至新的培养容器中。

• 推荐传代比例为1:3～1:8。

• 建立培养时可参考6.0×10⁴～8.0×10⁴个活细胞/cm²的接种密度。

• 加入适量完全培养基，使 MNT-1细胞均匀分布。

• 放入37℃、5% CO₂培养箱继续培养。

• 培养建议： 推荐维持培养密度为5.0×10⁴～1.0×10⁵个细胞/cm²。MNT-1细胞实际传代时，应结合细胞生长状态、活细胞数量及培养容器面积确定接种量。

• 注意事项： 消化过程中应避免敲击或剧烈摇晃培养瓶，以减少 MNT-1细胞成团现象。消化时间不宜过长，待细胞充分脱离后及时终止消化。

MNT-1细胞冻存

• 选择处于对数生长期、状态良好的 MNT-1细胞进行冻存。

• 按照细胞传代步骤进行胰酶消化。

• 加入完全培养基终止消化，轻柔吹打，制备均匀的细胞悬液。

• 计数活细胞，确定冻存细胞数量。

• 以125 × g离心10分钟，收集细胞沉淀。

• 弃去离心上清液，加入预先配制好的 MNT-1细胞专用冻存液。

• 轻柔吹打，使细胞充分重悬。

• 通用冻存指南推荐的参考细胞浓度为1×10⁶～5×10⁶个活细胞/mL。

• 将 MNT-1细胞悬液分装至冻存管中，每管参考分装体积为1.0～1.8 mL。

• 标记细胞名称、冻存日期、细胞代次及冻存数量。

• MNT-1细胞与冻存液混合后，在室温下平衡至少15分钟，但不超过40分钟。

• 使用程序降温设备或适宜的控速冻存容器进行降温。

• 推荐降温速率约为每分钟降低1℃。

• 使用控速冻存容器时，可将其预冷至4℃，随后转移至-70℃或更低温度的机械冰箱中，至少保存24小时。

• 完成初步降温后，将 MNT-1细胞冻存管迅速转移至液氮气相中长期保存。

• MNT-1细胞推荐长期保存温度低于-130℃。

• 不建议将-70℃或-80℃冰箱作为该细胞的长期保存条件。

• 冻存后建议抽取部分冻存管进行复苏验证，检查细胞存活率、贴壁情况及生长状态。

MNT-1细胞培养注意事项

• MNT-1细胞属于高色素性人黑色素瘤细胞，细胞内黑色素含量较高，日常培养过程中应注意观察细胞形态及色素积累情况。

• MNT-1细胞培养基应严格按照专用配方配制，不建议随意改变FBS、AIM-V或NEAA的添加比例。

• MNT-1细胞传代时应控制胰酶消化时间，避免过度消化造成细胞损伤。

• MNT-1细胞复苏及传代接种时应关注活细胞密度，保持适宜的接种数量，有利于细胞恢复及稳定生长。

• MNT-1细胞冻存时应使用专用冻存液配方，并采用程序降温方式，长期保存于液氮气相。

• 建议定期对 MNT-1细胞进行支原体检测，并按照实验室规范开展细胞身份鉴定，以保证实验材料质量。