CTLL-2细胞（小鼠T淋巴细胞）

CTLL-2细胞是一株源自C57BL/6小鼠的细胞毒性T淋巴细胞克隆。CTLL-2细胞依赖于白细胞介素-2（IL-2）进行生长，常用于测定IL-2的生物活性。

CTLL-2细胞是依赖IL-2的细胞毒性T细胞株，在体外培养时以悬浮状态生长，形态上类似于淋巴母细胞。CTLL-2细胞在免疫学研究中广泛应用，尤其是在研究T细胞功能和IL-2相关机制方面。

可以使用含有Con A的T-STIM（来自Becton Dickinson的大鼠IL-2培养补充剂）进行培养，或者按照产品说明制备大鼠生长因子。新鲜制备的大鼠生长因子通常能更有效地促进细胞生长。

大鼠生长因子的制备方法：

• 从体重约200克的雌性Sprague-Dawley大鼠中取出脾脏。

• 将脾脏粗碎后通过60号筛。

• 用RPMI 1640培养基洗涤细胞2-3次。

• 将细胞重新悬浮在含有1%热灭活胎牛血清、0.05 mM 2-巯基乙醇、15 mM HEPES、100单位/ml青霉素、100 mg/ml链霉素和1.0µg/ml刀豆球蛋白A的RPMI 1640培养基中，浓度为1-1.5 x 10^6个活细胞/ml。

• 在37°C的CO2培养箱中培养48小时。

• 在4°C下以16000 x g离心10分钟，收获上清液并用0.22微米的膜进行过滤消毒。

• 将生长因子储存于-60°C，避免冻融循环。大鼠生长因子在4°C下可保存一个月，并保持其活性。使用前将其添加到培养基中。

• 通常，每个脾脏可产生100-200 ml的大鼠生长因子，预计每个脾脏有1-2 x 10^8个细胞。

CTLL-2细胞特性特征

• CTLL-2细胞依赖白细胞介素-2（IL-2）生长

• CTLL-2细胞具有细胞毒性作用、对某些病毒和肿瘤细胞有杀伤作用

• CTLL-2细胞表达白细胞介素2（IL-2）受体
  

• CTLL-2细胞鼠痘病毒检测呈阴性

CTLL-2细胞参数表

CTLL-2小鼠T淋巴细胞培养教程

细胞复苏

• 收到冻存的CTLL-2细胞后，立即转入液氮储存或直接复苏。
  

• 复苏后，将CTLL-2细胞置于37°C培养箱中4-6小时，以稳定细胞状态。

• 复苏的第一、二天CTLL-2细胞死亡率可能较高，通常在第四天恢复正常。

• 注意事项：CTLL-2细胞冻存后再复苏需要2周左右时间调整状态，期间细胞碎片较多。

传代培养

• 传代密度：CTLL-2细胞密度达到80%-90%时进行传代。

• 传代比例：建议1:2传代（即1个T25瓶传至2个T25瓶或2个6cm培养皿）。

• 收集CTLL-2细胞。

• 1000 RPM 离心3-5分钟。

• 弃去上清液。

• 添加1-2 ml新鲜培养液后轻轻吹打混匀。

• 传代频率：建议每周传代3次，如周一、三、五。

• 接种密度：周一：0.02 M/ml、周三：0.02 M/ml、周五：0.015 M/ml

特别注意事项

• IL-2 添加：实验室常备 IL-2，发现CTLL-2细胞状态不好时（如散在细胞变多、细胞不生长），以100 U/ml浓度添加 IL-2，培养2-3天后CTLL-2细胞状态会改善。

• 细胞密度：需及时传代，CTLL-2细胞密度超过0.5 M/ml后，24小时内细胞会大量死亡。

• 培养时间：CTLL-2细胞的最长培养时间为4个月，约传代50次。

• 冻存密度：应达到6-10 M/管。

细胞观察

• 定期使用倒置显微镜观察CTLL-2细胞形态和生长状况。

• 细胞形态：CTLL-2细胞呈淋巴母细胞样，悬浮生长。

污染预防

• 严格无菌操作，定期检查CTLL-2细胞是否有污染。

• 如发现污染，立即隔离并处理受污染的CTLL-2细胞。

细胞冻存

• 冻存液：使用90% FBS + 10% DMSO。

• 步骤：将CTLL-2细胞悬浮在冻存液中，缓慢降温后转入液氮中长期保存。