货号:STM-CL-6106a 规格:1×10⁶cells/T25培养瓶或1mL冻存管
hepa1-6-luc细胞(小鼠肝癌细胞荧光素酶标记)
- 来源:C57L 小鼠的 BW7756 肝癌
- 细胞特征:贴壁细胞 , 上皮细胞样
- 培养基:DMEM+10% FBS+1mM Sodium Pyruvate+1% P/S
- 其他:hepa1-6-luc细胞通过慢病毒转染的方式携带 Luc 基因
Hepa 1-6-Luc细胞是以小鼠肝癌细胞 Hepa 1-6 为亲本建立的稳定荧光素酶报告基因细胞株。Hepa 1-6细胞来源于 C57L 小鼠的 BW7756 肝癌,属于小鼠肝源性肿瘤细胞,呈上皮样、贴壁生长,并具有白蛋白、甲胎蛋白(AFP)、α1-抗胰蛋白酶和淀粉酶等肝源性相关特征。Hepa 1-6-Luc细胞在亲本细胞基础上通过基因导入稳定表达 Firefly luciferase(萤火虫荧光素酶);Cellosaurus 收录的 Hepa 1-6-Luc(CVCL_C8Y7)显示,其Luc来源为 Photinus pyralis,并整合有 pac/PuroR 嘌呤霉素抗性基因。
Hepa 1-6-Luc细胞在加入 D-luciferin 等相应底物后可产生生物发光信号,可通过生物发光成像(BLI)对Luc阳性细胞进行检测和动态示踪。在实验条件一致的情况下,发光信号可作为细胞存活或肿瘤负荷变化的间接指标,因此特别适用于需要连续观察的体内肿瘤研究。稳定表达Firefly luciferase的Hepa 1-6细胞能够较好地保持亲本细胞的主要生物学特征,并可利用BLI连续监测体内肿瘤的生长和存活变化。需要注意BLI信号还会受到Luc表达水平、底物、组织深度及光学检测条件等因素影响,通常用于同一实验体系内的相对定量和动态比较,不能直接等同于绝对肿瘤细胞数量。
Hepa 1-6-Luc细胞兼具小鼠肝癌细胞模型和荧光素酶活体示踪两方面特点,可用于小鼠肝癌皮下或原位移植模型、肿瘤生长及负荷动态监测、抗肿瘤药物筛选与药效评价,以及肿瘤免疫、免疫检查点治疗和细胞免疫治疗等研究。
hepa1-6-luc细胞(小鼠肝癌细胞荧光素酶标记)特性特征
hepa1-6-luc细胞保留部分肝细胞谱系及肝癌分化特征,可检测到 Albumin、AFP、α1-antitrypsin 等肝源性相关分子。
上皮性标志:可表达 KRT18/CK18 等上皮相关标志物。
胆管/祖细胞相关特征:KRT7、KRT19 通常较低,不属于典型的胆管细胞样高表达模型。
MHC-I表达:hepa1-6-luc细胞基础状态下 H-2Kᵇ、H-2Dᵇ 等MHC-I分子相对较低,可用于研究肿瘤抗原呈递及免疫识别。
抗原呈递相关基因:涉及 B2m、Tap1、Tap2、Psmb8、Psmb9、H2-K1、H2-D1 等分子。
PD-L1表达:可表达 PD-L1/CD274,其表达具有条件依赖性,并可受到 IFN-γ 等炎症信号诱导。
免疫治疗研究:适用于PD-1/PD-L1轴、T细胞/NK细胞杀伤及肿瘤免疫微环境等研究。
信号通路特征:可用于 Wnt/β-catenin 相关肿瘤机制研究,并涉及β-catenin、BCL9、c-Myc、Cyclin D1等分子。
报告基因:稳定表达 Firefly luciferase(萤火虫荧光素酶,FLuc)。
筛选标记:相关登记株可携带 pac/PuroR嘌呤霉素抗性基因。
生物发光特性:加入D-luciferin等底物后可产生生物发光信号,可通过BLI进行细胞及肿瘤负荷动态示踪。
主要科研用途:适用于肝癌生物学、肿瘤免疫、抗肿瘤药物筛选与药效评价、免疫治疗、细胞治疗及活体生物发光成像等研究。
hepa1-6-luc细胞(小鼠肝癌细胞荧光素酶标记)参数表
| 细胞名称 | hepa1-6-luc细胞(小鼠肝癌细胞荧光素酶标记) |
| 细胞英文名称 | Hepa 1-6-Luc |
| 别名 | HEPA 1-6_luc;HEPA1-6-LUC;Hepa-1-6-luc;Hepa1-6-luc;Hepa 1-6/Luc;Hepa1-6/LUC |
| 亲本细胞 | Hepa 1-6。其常见同义名包括 Hepa1-6、Hepa-1-6、HEPA 1-6。 |
| 上游细胞谱系 | C57L/J 小鼠自发性 BW7756 肝癌 → Hepa-1 细胞系 → Hepa 1-6 细胞 → 稳定导入 Luc 报告基因后的 Hepa 1-6-Luc。 |
| 肿瘤来源 | BW7756 小鼠肝癌;该肿瘤在 C57L/J 小鼠中自发形成。Hepa 1-6 为由该肿瘤衍生建立的细胞系。 |
| 细胞类型 | 小鼠肝癌细胞;小鼠肝细胞癌细胞;肿瘤细胞。英文可描述为 murine hepatoma cell line 或 murine hepatocellular carcinoma cell line。 |
| 物种 | 小鼠,Mus musculus。 |
| 疾病来源 | 肝癌/肝细胞癌(hepatoma/hepatocellular carcinoma)。 |
| 细胞识别信息 | Hepa 1-6 常用 RRID:CVCL_0327;数据库登记的 Hepa 1-6-Luc 常用 RRID:CVCL_C8Y7。建议在论文、SOP、COA 和实验记录中注明细胞来源及 RRID。 |
| 生物学属性 | 长期传代的小鼠肿瘤细胞系;具有部分肝细胞谱系相关表达特征,但并不等同于正常原代肝细胞,也不代表所有人源或小鼠肝细胞癌的分子亚型。 |
| 生长方式 | 贴壁生长。 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样(epithelial-like)。常见为多角形或不规则贴壁细胞;细胞密度增高时可呈片状分布。 |
| 正常形态观察 | 正常状态下细胞贴壁均匀,细胞边界相对清晰,胞质较丰富,可呈多角形、梭形或不规则上皮样。细胞状态应结合传代时间、融合度和同批次对照综合判断。 |
| 异常形态提示 | 若出现圆缩、漂浮、贴壁下降、细胞碎片增多、胞质颗粒明显、增殖明显减慢、培养液快速变黄或浑浊,应排查过度消化、过度融合、培养基或血清问题、支原体、细菌/真菌污染及嘌呤霉素应激。 |
| 生长特性 | 肿瘤细胞,具有持续增殖能力;不同传代数、培养基、FBS、细胞密度、药物选择压力和 Luc 表达状态可影响实际生长速度。 |
| 参考倍增时间 | 约 26.99 ± 1.93 小时;另有资料记录约 30 小时。实际倍增时间建议以本实验室生长曲线为准。 |
| 推荐传代融合度 | 通常建议在约 70%–85% 融合度时传代;不建议长期超过 90% 融合度培养。 |
| 推荐传代比例 | 1:3–1:4。可根据细胞增殖速度、接种面积、实验时间安排和细胞状态适当调整。 |
| 推荐传代频率 | 每周 2–3 次。 |
| 常规换液频率 | 通常每 2–3 天换液一次;如细胞密度高、培养液颜色明显变黄、pH 下降或进行药物筛选,应根据实际情况提前换液。 |
| 推荐完全培养基 | DMEM + 10% FBS + 1 mM Sodium Pyruvate + 1% Penicillin-Streptomycin(P/S)。 |
| 培养环境 | 37°C+5% CO₂+95% 空气 |
| 湿度条件 | 饱和湿度培养。应定期检查培养箱水盘,减少蒸发、渗透压变化和边缘孔效应。 |
| 培养容器 | 常规细胞培养瓶、培养皿、6/12/24/48/96 孔细胞培养板均可使用;进行生物发光检测时应统一板型、孔底颜色和仪器检测参数。 |
| 推荐消化液 | 可采用 0.25% Trypsin-EDTA 或经实验室验证的常规细胞消化液。 |
| 消化原则 | 待细胞边缘收缩、间隙增大、部分细胞开始圆缩时,及时轻拍或吹打使细胞脱落,并加入含血清培养基终止消化。 |
| 消化注意事项 | 应避免消化时间过长、胰酶残留和剧烈吹打。过度消化可能降低贴壁率、活率、表面分子表达及后续转染、免疫杀伤或流式实验质量。 |
| 细胞接种建议 | 常规扩增时应避免极低密度接种;低密度可导致贴壁恢复慢、增殖不稳定和细胞应激。实际接种密度建议根据培养器皿、实验周期和生长曲线优化。 |
| 冻存液配方 | 55% 基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO。 |
| 冻存细胞状态 | 建议选择对数生长期、形态正常、贴壁良好、污染检测合格且活率较高的细胞进行冻存。 |
| 冻存降温方式 | 建议程序降温,或采用约 −1°C/分钟的缓慢降温方式。 |
| 短期冻存条件 | 可置于 −80°C 过夜或按实验室 SOP 规定的短期过渡时间保存;应尽快转入液氮。 |
| 长期保存条件 | 液氮气相保存。 |
| 肝源性表达特征 | Hepa 1-6 细胞可表达或分泌白蛋白(Albumin/Alb)、甲胎蛋白(AFP/Afp)、α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin/Serpina1)和淀粉酶相关产物。 |
| 白蛋白表达 | 可检测 Alb/Albumin,可作为肝细胞来源或肝分化相关表型的辅助指标。Alb 阳性并不表示该细胞等同于正常成熟肝细胞。 |
| AFP 表达 | 可检测 Afp/AFP。AFP 是肝细胞癌常用的肿瘤相关标志物之一,可用于 qPCR、Western blot、ELISA、免疫荧光或免疫组化辅助验证。 |
| α1-抗胰蛋白酶表达 | 可检测 Serpina1/α1-antitrypsin 相关表达或分泌特征,反映部分肝细胞蛋白合成功能。 |
| 上皮/肝细胞相关标志 | 可根据研究需要检测 Krt18/CK18 等上皮及肝细胞癌相关标志物。 |
| 胆管/肝祖细胞相关标志 | Krt7、Krt19、Epcam、Sox9、Prom1/CD133 等应通过本批次检测确定。不能仅根据 Hepa 1-6 名称就将其界定为胆管样、高 CK19 或高肝祖细胞样肿瘤模型。 |
| 肿瘤干性相关特征 | 可检测 CD44、CD133/Prom1、Aldh1a1、Epcam、Sox9、Nanog、Sox2、Oct4 等;Hepa 1-6 不宜默认视为高肿瘤干性或高球形成能力细胞。 |
| EMT/迁移侵袭相关检测 | 如研究 EMT、迁移或侵袭,可检测 Cdh1/E-cadherin、Cdh2/N-cadherin、Vim/Vimentin、Snai1、Snai2、Zeb1、Twist1、Mmp2、Mmp9。相关表达需随培养条件和药物处理实际验证。 |
| Wnt/β-catenin 相关研究 | Hepa 1-6 可用于 Wnt/β-catenin 相关肝癌机制研究;可检测 Ctnnb1、active β-catenin、Bcl9、Myc、Ccnd1/Cyclin D1、Axin2、Lgr5 等。若研究具体驱动突变,不应仅依据文献推断,应对当前细胞批次进行测序或功能验证。 |
| 增殖/细胞周期检测 | 可根据实验目的检测 Ki-67、Pcna、Mki67、Myc、Ccnd1、Cdk4、Cdk6、Cdkn1a/p21、Cdkn1b/p27、Ccnb1 等。 |
| 凋亡/应激检测 | 可检测 Annexin V/PI、cleaved-Caspase-3、Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl2、PARP、ROS、线粒体膜电位等。 |
| 代谢相关检测 | 可结合肝癌研究需求检测 Hif1a、Vegfa、Slc2a1/GLUT1、Ldha、Fasn、Acaca、Srebf1、Pparα、Cpt1a、Gls、Slc7a5 等。具体表型受血清、氧浓度、细胞密度和药物条件影响。 |
| 基础 MHC-I 表达 | Hepa 1-6 的基础 MHC-I 表达可能相对偏低。开展抗原特异性 CD8+ T 细胞杀伤或免疫治疗研究时,应预先检测实际批次的 MHC-I 水平。 |
| 建议检测的 MHC-I 分子 | H-2Kᵇ、H-2Dᵇ、B2m;基因层面可检测 H2-K1、H2-D1、B2m。建议使用流式细胞术进行定量。 |
| 抗原加工/呈递相关分子 | 可检测 Tap1、Tap2、Tapbp、Psmb8、Psmb9、Nlrc5 等,用于评估抗原加工和呈递能力。 |
| PD-L1/CD274 表达 | PD-L1 表达具有条件依赖性;在 IFN-γ 等炎症信号刺激下可上调。基线表达水平及诱导幅度应以实际批次、培养状态和检测平台为准。 |
| 其他免疫检查点检测 | 如需开展免疫逃逸研究,可检测 Pdcd1lg2/PD-L2、Galectin-9/Lgals9、Cd47、B7-H3/Cd276、B7-H4/Vtcn1 等;并非所有分子都必然高表达。 |
| 免疫实验建议 | 对 CD8+ T、NK、CAR-T、CAR-NK 或巨噬细胞共培养实验,建议先进行 H-2Kᵇ/H-2Dᵇ、PD-L1、CD44、CD133 和活率检测,并设置 IFN-γ 预刺激或不预刺激对照。 |
| 同系模型注意事项 | Hepa 1-6 来源于 C57L/J,而非严格意义上的 C57BL/6 来源。若用于 C57BL/6 小鼠,应通过小规模预实验确认成瘤率、肿瘤生长动力学、免疫排斥风险和批间重复性。 |
| Luc 标记类型 | 稳定表达 Luciferase(Luc)报告基因的生物发光标记细胞。Luc 通常为萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,FLuc)。 |
| Luc 导入方式 | 通过慢病毒转导方式稳定导入 Luc 基因。 |
| Luc 信号性质 | 为生物发光(bioluminescence)信号,而非 GFP、RFP、mCherry 等荧光蛋白信号。 |
| Luc 发光原理 | 在适宜底物存在时,Luc 酶催化发光反应。体外常采用发光酶标仪或成像系统读取相对发光单位;体内常采用小动物活体生物发光成像系统检测。 |
| 常用发光底物 | 通常使用 D-luciferin 或与实际 Luc 系统匹配的专用底物。底物浓度、孵育时间、给药方式和采集窗口应经过预实验确定。 |
| 发光信号的含义 | 在相同底物、细胞数、培养条件和仪器参数下,发光信号通常与存活的 Luc 阳性细胞数量或肿瘤负荷呈正相关。 |
| 发光信号的局限性 | 发光值受 Luc 表达量、细胞数、细胞活性、ATP、氧气、底物浓度、底物渗透、细胞代谢、组织深度、动物毛色、血流、肿瘤坏死及仪器参数影响,因此不能直接等同于绝对细胞数。 |
| Luc 稳定性 | 该细胞为 Luc 稳定转染细胞;随传代次数增加,Luc 发光强度可能逐渐减弱。 |
| Luc 信号下降的可能原因 | 长期未进行筛选维持、Luc 低表达/阴性细胞比例增加、细胞群异质性、整合表达漂移、传代应激、过度融合、培养条件变化、细胞代谢状态改变或检测条件不一致。 |
| Luc 信号监测建议 | 建议在复苏后、建立工作细胞库前、关键实验前、动物接种前及长期培养期间定期检测;使用相同细胞数、底物浓度、孵育时间、板型和仪器设置进行横向比较。 |
| 标准曲线建议 | 建议用梯度细胞数建立“细胞数—相对发光强度(RLU)”标准曲线,明确线性范围、检测下限和仪器饱和区间。 |
| Luc 信号恢复策略 | 当发光信号明显下降时,建议优先复苏低代次留种细胞;如需对当前细胞群进行恢复,可在完成冻存留种后采用嘌呤霉素重新筛选。 |
| 嘌呤霉素用途 | 用于维持或恢复 Luc 阳性细胞群的选择压力,减少 Luc 低表达或阴性细胞的富集。 |
| 嘌呤霉素筛选前提 | 建议在筛选前先冻存留种,保存未经高强度药物压力处理的细胞备份。 |
| 建议筛选频率 | 可每 2–3 代进行一次筛选或评估;实际筛选频率应以 Luc 信号稳定性、细胞状态和实验需求为依据。 |
| 初始嘌呤霉素浓度 | 建议先使用 1 μg/mL 嘌呤霉素的完全培养基进行维持培养或筛选。 |
| 强化筛选浓度 | 当细胞状态较好、存活稳定时,可逐步提高至 2 μg/mL。 |
| 最高参考浓度 | 可逐步升至最高 5 μg/mL。高浓度使用时应密切监测细胞形态、贴壁率、死亡率和增殖速度。 |
| 低剂量维持策略 | 如高浓度嘌呤霉素导致细胞活力明显下降,可改用 0.5–1 μg/mL 嘌呤霉素持续培养以维持选择压力。 |
| 嘌呤霉素优化建议 | 建议针对实际到货批次、实际培养基和 FBS 批次进行嘌呤霉素 kill curve,以确定最低有效维持浓度和适合的强化筛选浓度。 |
| 筛选期间换液 | 筛选期间应根据细胞死亡情况及时更换含药培养基,清除死亡细胞和碎片;频率可视细胞状态调整。 |
| 关键实验前撤药 | 进行细胞增殖、药物敏感性、代谢、转录组、蛋白组、免疫杀伤、转染或动物实验前,应评估是否撤除嘌呤霉素并给予恢复期,避免选择药物直接影响实验结论。 |
| 抗性标记注意事项 | 某些 Hepa 1-6-Luc 构建可能含 PuroR/pac 基因,但不同供应商构建不一定完全相同;是否含嘌呤霉素抗性及其维持条件应以实际载体图谱、COA 和供应商资料为准。 |
| 体外应用 | 可用于肝癌细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移、侵袭、EMT、肿瘤代谢、氧化应激、缺氧、细胞信号通路及药物作用机制研究。 |
| 药物筛选应用 | 可用于化疗药、靶向药、抗体药物、代谢抑制剂、表观遗传药物、免疫调节剂及联合治疗方案的体外药效评价。 |
| 3D 培养应用 | 可用于肿瘤球、悬滴球、超低吸附培养和其他 3D 模型;需注意 3D 球体内底物渗透、氧梯度和细胞坏死对 Luc 信号的影响。 |
| 免疫杀伤应用 | 可用于 CD8+ T 细胞、NK 细胞、CAR-T、CAR-NK、巨噬细胞以及双抗/检查点抑制剂相关共培养实验。 |
| 免疫杀伤读数建议 | Luc 发光下降可作为肿瘤细胞相对负荷降低的指标,但建议同步采用 Annexin V/PI、活死染料、绝对计数珠、流式细胞计数或成像方法进行正交验证。 |
| 转染应用 | Hepa 1-6 可作为转染宿主;Hepa 1-6-Luc 也可进一步进行质粒转染、病毒转导或基因编辑。应注意新导入载体的筛选标记不得与 PuroR/嘌呤霉素体系冲突。 |
| 体内应用 | 可用于皮下荷瘤、原位肝癌、转移相关模型和其他接种途径的小鼠肿瘤模型;Luc 标记有利于非侵入性连续追踪肿瘤细胞负荷。 |
| 支原体检测 | 建议在复苏后、长期培养中、建立细胞库前、动物实验前和所有关键功能实验前进行检测。可按实验室 SOP 定期检测,如每月一次或每 4–6 周一次。 |
| 建议留样信息 | 建议保留早代冻存细胞、DNA、RNA、蛋白及对应的 Luc 发光数据;记录细胞批号、传代数、培养基、血清批次、筛选药物浓度、检测日期与操作者。 |
| 生物安全与实验室管理 | 建议在 II 级生物安全柜内进行细胞操作,并遵循机构针对肿瘤细胞、慢病毒构建来源细胞、抗性基因细胞及动物实验的生物安全 SOP。 |
| 适用范围 | 仅供科研使用(Research Use Only, RUO)。 |
| 批次差异声明 | 不同来源的 Hepa 1-6-Luc 可能在 Luc 载体、病毒构建方式、整合位点、Luc 表达强度、抗性标记、筛选方式、传代历史、细胞群体组成和体内成瘤性上存在差异。关键参数应以实际批次 COA、构建资料和本实验室验证结果为准。 |
培养教程
hepa1-6-luc小鼠肝癌细胞荧光素酶标记培养教程
hepa1-6-luc细胞复苏
复苏前将完全培养基预温至37°C,准备T25培养瓶,并预先加入4–5 mL完全培养基。同时准备15 mL无菌离心管,并确认培养箱温度稳定在37°C、CO₂浓度为5%。
hepa1-6-luc细胞冻存复苏后处于应激恢复阶段,首次复苏时建议暂不加入嘌呤霉素,使细胞优先恢复贴壁和增殖状态。待细胞状态稳定并完成首次传代后,再根据实验需求决定是否进行嘌呤霉素筛选或维持。
复苏步骤
从液氮中取出冻存管,立即放入37°C水浴中快速融化,并轻轻晃动。
当冻存液基本融化、仅剩少量冰晶时立即取出,尽量缩短细胞在含DMSO冻存液中的暴露时间。
用70%乙醇擦拭冻存管外壁,待干燥后转入生物安全柜。
将细胞悬液缓慢加入含5–8 mL预温完全培养基的15 mL离心管中,并轻轻混匀。
以约200–300 × g离心3–5分钟。
小心弃去上清,尽量去除含DMSO的培养液,避免扰动细胞沉淀。
加入1–2 mL新鲜完全培养基,轻柔吹打使细胞均匀重悬。
将细胞悬液接种至预先加入4–5 mL完全培养基的T25培养瓶中。
前后、左右轻轻移动培养瓶,使细胞均匀分布。
将培养瓶置于37°C、5% CO₂培养箱中培养。
复苏后处理
复苏后早期出现部分圆形、漂浮细胞及少量碎片属于常见的复苏应激表现。建议在12–24小时观察细胞贴壁和形态,并根据细胞状态更换培养基。
一般情况下,hepa1-6-luc细胞在复苏后应先恢复正常贴壁和增殖。待细胞达到约70%–85%融合度后进行首次传代。重要实验使用前建议确认细胞状态、活率及支原体检测结果。
hepa1-6-luc细胞传代
传代前将完全培养基预温至37°C,并准备无钙、无镁PBS和0.25% Trypsin-EDTA。根据预计细胞数量准备新的培养瓶。
建议记录细胞名称、传代日期、传代数、融合度、培养基批次以及是否使用嘌呤霉素。
传代步骤
显微镜下观察细胞,确认融合度约为70%–85%,细胞形态正常且无明显污染。
吸除培养瓶中的旧培养基。
加入适量无钙、无镁PBS轻柔清洗细胞一次。
T25:约2–3 mL;
T75:约5–10 mL。
吸尽PBS。
加入0.25% Trypsin-EDTA,使细胞充分接触消化液。
T25:约0.5–1 mL;
T75:约1.5–2 mL。
置于37°C条件下进行消化,并持续观察细胞状态。
当细胞逐渐圆缩、细胞间隙增大并开始脱落时,轻拍培养瓶辅助细胞脱落。
多数细胞脱落后立即加入完全培养基终止消化。
轻柔吹打约3–5次,使细胞形成均匀悬液,避免剧烈吹打及产生大量气泡。
根据需要进行细胞计数和活率检测。
按约1:3–1:4比例进行常规传代,并根据实际增殖速度进行调整。
将细胞接种至含预温完全培养基的新培养瓶中。
轻轻前后、左右移动培养瓶,使细胞均匀分布。
放入37°C、5% CO₂培养箱继续培养。
传代注意事项
hepa1-6-luc细胞传代时应避免消化时间过长。过度消化或剧烈吹打可能造成细胞膜损伤,影响贴壁和后续增殖。
用于Luc检测、药物实验、免疫细胞共培养或动物实验时,建议使用处于对数生长期、形态良好、活率较高的细胞,并尽量控制细胞传代次数。
hepa1-6-luc细胞冻存
建议选择处于对数生长期、融合度约70%–85%、形态正常且增殖状态良好的hepa1-6-luc细胞进行冻存。
冻存前应确认细胞无明显污染,重要细胞库建议完成支原体检测,并记录细胞传代数及Luc信号状态。
本培养方案采用冻存液:
55%基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO。
冻存管标签建议注明细胞名称、批次、传代数、冻存日期、细胞数量及是否经过嘌呤霉素筛选。
冻存步骤
选择融合度约70%–85%的健康细胞。
按常规传代方法消化并收集细胞。
以约200–300 × g离心3–5分钟。
小心弃去上清。
使用冻存液轻柔重悬细胞,使细胞分散均匀。
建议每管冻存约1×10⁶–3×10⁶个活细胞,具体数量可根据实验室条件进行调整。
将细胞悬液分装至冻存管中,通常每管约1 mL。
在冻存管上完整标注细胞信息。
使用程序降温盒或其他能够实现约1°C/min降温的方式进行缓慢降温。
放入−80°C冰箱过夜。
次日尽快转移至液氮中进行长期保存。
更新细胞库存记录,包括冻存位置、传代数、冻存日期及相关质量检测结果。
hepa1-6-luc细胞冻存管理
建议采用低代次细胞建立工作细胞库,减少长期连续传代引起的细胞表型变化以及Luc表达漂移。
对于经过嘌呤霉素筛选的hepa1-6-luc细胞,应记录筛选浓度和处理时间,并建议同时保留筛选前后的冻存细胞。复苏新的冻存批次后,可重新观察细胞形态、活率及Luc信号,以确认细胞状态稳定。
同一冻存管复苏后不建议再次冻回。进行长期实验时,应从独立冻存管重新建立培养,以降低反复冻融和长期传代对细胞状态的影响。
相关资料
- HUH-7人肝癌细胞系实验过程中的常见疑问
- 问:HUH-7细胞是如何被建立的?答:HUH-7细胞系由Nakabayashi等人建立,源...
- 掌握HepG2细胞培养技巧:常见问题一览
- 摘要:HepG2细胞是一种来源于人肝癌的细胞系,在肝癌研究、药物筛选等领域有着重要的应用价...
- 查看完整内容 >
STR鉴定及相关
| STR 位点 | 参考等位基因型 |
| Mouse STR 1-1 | 14, 15, 16 |
| Mouse STR 1-2 | 13 |
| Mouse STR 2-1 | 14 |
| Mouse STR 3-2 | 10 |
| Mouse STR 4-2 | 18.3, 19.3 |
| Mouse STR 5-5 | 17 |
| Mouse STR 6-4 | 18, 19 |
| Mouse STR 6-7 | 15 |
| Mouse STR 7-1 | 25.2 |
| Mouse STR 8-1 | 15 |
| Mouse STR 11-2 | 16 |
| Mouse STR 12-1 | 17 |
| Mouse STR 13-1 | 17.2 |
| Mouse STR 15-3 | 17, 18, 19 |
| Mouse STR 17-2 | 14 |
| Mouse STR 18-3 | 16, 17 |
| Mouse STR 19-2 | 10, 11 |
| Mouse STR X-1 | 25 |
参考文献
- Huh-7肝癌干细胞培养的方法学建立及雷公藤红素抑制Huh-7肝癌干细胞的作用机制 《安徽中医药大学》 2017年
- 摘要:目的建立Huh7肝癌干细胞的培养体系并研究雷公藤红素抑制Huh7肝癌干细胞的作用机制。方法...
- DPT、SPON1基因过表达对人肝癌细胞SK-Hep-1、HepG2增殖及侵袭迁移的影响 《广州医科大学》 2018年
- 摘要:...研究皮肤桥蛋白(DPT)和底板反应蛋白(SPON1)基因过表达后对肝癌细胞增殖、迁移...
- 靶向药物联合应用对肝癌细胞SK-Hep-1增殖的影响及其机制 肿瘤防治研究 > 2022年11期
- 摘要:目的 探讨靶向药物联合应用对多驱动基因调控增殖的肝癌细胞SK-Hep-1的影响及作用机制....
- 绞股蓝含药血浆对人肝癌Huh-7细胞的增殖、迁移及TGF-β_1的影响 《广西中医药大学》 2017年
- 摘要:目的:观察绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum GP)含药血浆对人肝癌H...
- 山奈酚对大鼠肝癌细胞CBRH7919的增殖抑制及诱导凋亡作用 《广州中医药大学学报》 2010年03期
- 摘要:【目的】观察山奈酚对大鼠肝癌细胞CBRH7919增殖抑制、诱导凋亡和细胞周期的影响。【方法...
- 查看完整内容 >
下一篇:没有了
细胞培养
细胞工程
细胞生物学
参考文献
关于思泰默
品牌价值
