C166细胞（小鼠血管内皮细胞，自发永生化细胞）

C166细胞源自约12日龄小鼠胚胎卵黄囊，是一种具有稳定永生化特性的胚胎期血管内皮细胞模型，广泛用于血管生物学、干细胞稳态及心血管疾病机制研究。C166细胞最早由 R. Auerbach 团队构建，并已被包括 ATCC（编号 CRL-2581）在内的多个细胞库收录，为研究者提供标准化的实验材料。

C166细胞来自雌性 NMRI/GSF 小鼠与携带激活型人 fes（fps/fes）原癌基因的雄性CD-1小鼠杂交所得F1胚胎。由于这些转基因小鼠普遍呈现血管扩增及多灶性血管瘤的特征，其胚胎卵黄囊组织富含内皮细胞，因而建立了永生化c166小鼠血管内皮细胞系。

C166细胞呈典型贴壁生长方式，形态多为梭形或多边形，能够形成紧密排列的内皮单层。放置在基质胶上时重排成管状结构，并在汇合时保留鹅卵石形态。C166细胞增殖速度较快，传代稳定，适合长期实验及重复验证。

C166细胞可支持多能造血干细胞的持续扩增，是研究其分化轨迹和胚胎造血微环境的可靠模型。C166细胞稳定的内皮功能表型使其可用于解析内皮细胞分化、血管生成机制、器官特异性内皮异质性以及炎症反应调控等一系列问题，被视为研究胚胎期血管系统的重要实验平台。

C166小鼠血管内皮细胞特性特征

• C166细胞具备典型的内皮功能表型（管状形成、鹅卵石形态），提示内皮相关黏附、迁移和重构能力完好。

• 组成型表达由抗体 MECA-99 识别的血管寻址蛋白，有利于研究血管床特异性、器官定向及内皮‑免疫/造血细胞互作。

• C166细胞表面标志：CD44 阳性、CD45 阴性。

• C166细胞被广泛用于研究炎症因子对内皮功能的影响、内皮通透性调控、NF‑κB、MAPK 等信号通路激活及低氧反应。

• C166细胞来源转基因小鼠携带多个拷贝的激活型人 fes (fps/fes) 原癌基因等位基因，体内表现出血管异常丰富，并进展为多灶性血管瘤，为 C166 的“高 fes 活性 + 血管表型”奠定遗传背景。

• C166细胞高水平表达由 fes (fps/fes) 原癌基因编码的细胞质蛋白酪氨酸激酶，是C166细胞最突出的基因/分子特征之一。

• 该酪氨酸激酶与内皮细胞存活、迁移、血管生成以及肿瘤血管形成密切相关，因此C166细胞适合用于研究 fes/fps 相关信号轴、血管瘤发生及靶向酪氨酸激酶干预策略。

C166细胞参数表

C166小鼠血管内皮细胞培养教程

C166细胞复苏流程

• 快速解冻与去除DMSO
  

• 将C166细胞冻存管从液氮取出后立即置入 37 ℃ 水浴中，使其在 1–2 min 内完全融化。

• 消毒冻存管外壁后转入超净台操作。

• 将细胞悬液轻柔加入含 4–6 mL 完全培养基的离心管中。

• 以约 200 g 离心 3–5 min 去除 DMSO。

• 以 6–8 mL 完全培养基重悬 C166细胞。

C166细胞接种与换液

• 将重悬的 C166细胞 转移至 T25/T75 培养瓶。

• 轻轻摇匀后放入培养箱培养。

• 12–24 h 后进行第一次换液，以去除死亡细胞及残余 DMSO。

• 之后每 2–3 d 换液一次。C166细胞 通常 4–5 d 可至 70–80% 汇合。

C166细胞日常传代流程

• C166细胞 在 80–90% 汇合时传代最佳。

• 当观察到细胞过度拉长、培养液变黄或局部堆积，应提前处理。

• 胰酶（0.25% Trypsin-EDTA）与完全培养基预温至 37 ℃。

• 准备 PBS（无钙镁）与新的培养瓶。

传代步骤

• 弃去旧培养基，用 PBS 缓冲液轻轻洗涤一次。

• 加入 0.5–1 mL 胰酶，覆盖整个 C166细胞 层。

• 放入培养箱消化 1–3 min，期间可短暂观察细胞变圆、松动情况。

• 轻敲瓶壁协助细胞脱落。

• 加入完全培养基终止消化，并轻轻吹打形成单细胞悬液。

• 离心（1000 rpm，3–5 min）后弃上清。

• 重悬 C166细胞，并按需求进行计数。

• 按 1:2–1:5 比例接种于新瓶，加入 6–8 mL 完全培养基继续培养。

• 注意：C166细胞对FBS批次差异较敏感，若传代后贴壁缓慢，应优先检测血清质量。

C166细胞冻存流程

• 冻存液配置：90% FBS + 10% DMSO（现配现用）。

• C166细胞 应处于生长旺盛、状态均一的对数生长期。

• 冻存液预冷至 4 ℃，冻存管需提前标记。

• 按传代流程消化 C166细胞。

• 离心后弃去上清，可选择 PBS 清洗一次。

• 用预冷冻存液重悬，使浓度达 1×10⁶–1×10⁷ cells/mL。

• 将 C166细胞 分装至冻存管，每管 1 mL。

• 放入程序降温盒以约 1 ℃/min 的速率在 −80 ℃ 冷冻过夜。

• 次日移入液氮罐长期保存，并记录编号及位置。

C166细胞维护技巧与优化建议

• 刚复苏的C166细胞建议培养1–2代后再进入关键实验。

• 状态不佳可尝试：更换更优批次 FBS；降低传代稀释倍数；缩短胰酶作用时间。

• 若进行内皮管腔形成实验，建议选用2–4代、状态最佳的C166细胞。