9L/lacZ 大鼠胶质肉瘤细胞

9L/lacZ细胞是一种大鼠胶质肉瘤细胞系，最早于1989年从9L细胞系发展而来，9L细胞系是大鼠硝基脲诱导的胶质瘤细胞系。

9L/lacZ细胞系是通过将携带编码β-半乳糖苷酶（lacZ基因）的大肠杆菌与带有G418抗性的Tn5新霉素基因的BAG逆转录病毒载体感染9L细胞而获得的。细胞在G418存在下培养14天，经过克隆并检测β-半乳糖苷酶生成后，9L/lacZ细胞系被成功建立。

9L/lacZ 大鼠胶质肉瘤细胞是该细胞系是为数不多的能够对大脑中的微观肿瘤进行定量分析的模型之一。A7r5肿瘤细胞模仿了人脑肿瘤生长和扩散的重要特征。9L/lacZ细胞表达lacZ报告基因产物，即大肠杆菌衍生的β-gal，并且可以鉴定单个肿瘤细胞。淋巴细胞和其他反应细胞可以通过在同一载玻片上用抗体双重标记来识别。染色细胞和背景之间的对比有助于图像分析。β-gal的表达非常稳定，但9L/lacZ细胞在培养基中生长数月后可能需要重新克隆。

细胞特性：

• 细胞形态： 成纤维细胞样，呈贴壁生长的特性。

• 生长特性： 9L/lacZ细胞在培养基DMEM中添加10% FBS和1% P/S的条件下生长良好。

• 基因表达： 9L/lacZ细胞表达β-半乳糖苷酶（β-gal），这是由大肠杆菌lacZ基因编码的产品。

• 致瘤性： 在CD Fischer 344大鼠的大脑中能够形成肿瘤。

• 生物安全等级： 该细胞系被分类为生物安全等级1级，属于无特殊危害生物。

9L/lacZ 大鼠胶质肉瘤细胞产品参数表

应用及研究价值：

• 作为肿瘤模型： 9L/lacZ细胞是一种重要的大脑微观肿瘤模型，其模拟了人类大脑肿瘤的生长和传播特性。这种模型对于研究大脑肿瘤的发生机制、生长特性以及治疗方法具有重要意义。

• 图像分析： 由于9L/lacZ细胞表达β-半乳糖苷酶，使得通过组织切片的组织化学染色可以轻松鉴定单个肿瘤细胞。另外，通过双标记抗体进行淋巴细胞和其他响应细胞的鉴定，以及染色细胞和背景的对比分析有助于图像分析，为研究者提供了一种便捷的方式来研究肿瘤细胞的特性。

• 基因表达稳定性： β-半乳糖苷酶的表达在9L/lacZ细胞中非常稳定，这使得该细胞系成为进行长期实验和研究的理想选择，同时需要注意细胞在培养数月后可能需要重新进行克隆。

1.培养基准备

• 使用完全培养基：DMEM + 10% FBS + 1% P/S。

• 在使用前确保培养基无菌，如有沉淀应充分振荡均匀。

2. 培养环境

• 环境：95%空气，5%CO2，37℃。

• 使用CO2培养箱，确保细胞处于稳定的温度和气体环境中。

3. 传代方法

3.1. 消化与收集

1. 将原培养液吸出。

2. 加入适量的PBS轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS。

3. 加入适量的胰酶，轻轻晃动培养瓶使胰酶充分润洗细胞。

4. 将培养瓶放入培养箱消化，直至细胞间隙变大，但未完全脱落。

5. 加入含血清的培养基终止消化，吹打细胞使之脱壁并使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液。

6. 收集细胞悬液离心，离心后吸出上清丢弃。

3.2. 接种与培养

1. 加入新鲜的完全培养基，轻轻重悬细胞，按比例接种到新培养瓶，补足培养基。

2. 培养瓶盖可以拧松或使用透气瓶盖。

3. 放回培养箱培养，注意观察细胞生长情况。

4. 液氮冻存操作

4.1. 冻存液制备

• 建议使用以下两种冻存液之一：

• 55%基础培养基+40% FBS + 5% DMSO

• 商品化无血清冻存液

4.2. 冻存操作

1. 消化并离心获得细胞沉淀后，加入配置好的冻存液轻轻重悬细胞。

2. 将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管。

3. 将冻存管放入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存。

5. 注意事项

• 传代细胞时注意控制消化时间，避免过度消化导致细胞损伤。

• 在液氮冻存后，及时复苏一管细胞检查冻存活性，确保冻存效果。

• 注意消化传代细胞时吹打细胞要轻柔，避免影响细胞状态。