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货号：STM-CL-5227 规格：1×10⁶cells/T25培养瓶或1mL冻存管
MET5A细胞（人间皮细胞）
- 来源：膜间皮细胞；SV40转化
- 细胞特征：贴壁细胞，上皮细胞样
- 培养基：M199+10% FBS+ 0.5% ITS-G（100×）+3.3 nM EGF+400 nM hydrocortisone+1%P/S
- 其他：经过SV40转化的永生化细胞系
MET-5A细胞系源自正常成人胸膜液中的间皮细胞，转染过程中使用了含有SV40病毒早期区基因和RSV长末端重复序列（LTR）的pRSV-T质粒，采用DNA锶磷酸盐共沉淀法。转染后的细胞进行了连续传代，并每周更换培养基，经过28天后，对转化的克隆进行了独立培养。
pRSV-T质粒的关键作用是通过SV40大T抗原抑制细胞周期调控蛋白，如p53和pRb，使MET-5A细胞能够逃过正常的细胞周期检查点，保持持续的增殖能力，从而实现了细胞的永生化。
MET-5A细胞表现出间皮细胞的特征，包括对波形蛋白（vimentin）、细胞角蛋白（cytokeratin）和SV40T抗原的阳性染色表达。这些细胞同时表达间皮细胞和上皮细胞的某些标记物，反映了它们的间皮细胞起源和上皮样形态。
MET5A细胞特性
特殊性质：经过SV40转化的永生化细胞系，但在免疫抑制小鼠中未显示致瘤性
体外特性：能在半固体培养条件下形成集落
MeT-5A细胞对波形蛋白、角蛋白和SV40T抗原呈阳性染色。
转染MET-5A细胞使用了pRSV-T质粒，含有SV40病毒的早期区基因和RSV长末端重复序列（LTR）。
转染方法采用了DNA锶磷酸盐共沉淀法。
MET5A细胞参数表
| 细胞名称 | MET5A细胞（人间皮细胞） |
| 细胞别称 | MeT5A; MeT5A; Met5A; MET5A; MesothelialcellstransfectedwithpRSV-T5A) |
| 物种来源 | 人源(Homo sapiens); 非癌个体胸膜液 |
| 细胞信息 | 间皮来源上皮样细胞系; 上皮细胞样，贴壁生长; 约1990年 |
| 转染载体/基因/启动子 | pRSV-T质粒; SV40早期区基因; RSV长末端重复序列(LTR) |
| 转染方法/染色体 | DNA锶磷酸盐共沉淀法; 可能为非整倍体（需验证） |
| 基础培养基 | M199基础培养基(86%); 特级胎牛血清(10%); 青霉素-链霉素(1%) |
| 添加剂 | ITS(1%); HEPES(2%); NaHCO3(1.5g/L) |
| 生长因子 | 氢化可的松(400 nM); 重组人EGF(3.3 nM) |
| 培养环境 | 37℃; 5% CO2; 70-80%湿度; pH 7.2-7.4（需验证） |
| 生长特性 | 强贴壁性; 首次传代1:2; 70-80%汇合度时传代 |
| 倍增时间 | 约24-48小时（需验证） |
| 冻存液/温度/复苏率 | 90%血清+10%DMSO; -80℃短期/液氮长期; >80%存活（需验证） |
| STR鉴定/细胞标记物 | 已通过; 波形蛋白(+), 细胞角蛋白(+), SV40 T抗原(+) |
| 其他可能标记物 | 钙网蛋白(+), 中间丝蛋白(+)（需验证） |
| 主要用途 | 间皮细胞生物学研究; 化学和生物制剂筛选; 毒理学研究; 间皮瘤研究（对照） |
| 体外特性/转染效率 | 半固体培养可形成集落; 转染效率中等（需验证） |
| 细胞因子/酶/粘附分子 | IL-6, IL-8; MMP-2, MMP-9; ICAM-1, VCAM-1（均需验证） |
| 生物安全等级/致瘤性/病毒检测 | BSL-1; 免疫抑制小鼠中无致瘤性; 已进行病毒检测（结果需验证） |
| 细胞数量/规格 | >1x10^6个细胞/包装; T25瓶或1mL冻存管 |
| 永生化状态/细胞周期 | SV40转化永生化; 持续增殖，绕过正常细胞周期检查点 |
| 细胞寿命/药物敏感性 | 理论上无限传代; 对特定化疗药物的敏感性（需验证） |
| 应激反应/基因表达 | 氧化应激反应可能异于原代细胞; 基因表达谱可能有差异（需验证） |
| 主要用途 | 前列腺癌研究，药物筛选，雄激素信号通路研究，EMT研究 |
| 细胞库编号 | ATCC: CRL-1740; ECACC: 89110211; BCRJ: 0149; BCRC: 60088 |
培养教程
MET5A人间皮细胞培养教程
MET-5A细胞复苏步骤
将冻存管在37°C水浴中快速解冻（1-2分钟）。
将解冻的MET-5A细胞悬液转移到含4-6mL完全培养基的离心管中。
以1000 RPM离心3-5分钟。
弃上清，用完全培养基重悬MET-5A细胞。
将MET-5A细胞悬液转移到含6-8mL完全培养基的培养瓶中。
在37°C下培养过夜。
次日观察MET-5A细胞生长情况和密度。
MET-5A细胞传代步骤
当MET-5A细胞密度达80-90%时进行传代。
弃培养上清，用PBS洗涤1-2次。
加入0.25% 胰蛋白酶-0.53mM EDTA消化液（T25瓶用1-2mL）。
37°C消化1-2分钟，观察MET-5A细胞脱落情况。
加入3-4mL含10% FBS的培养基终止消化。
以1000 RPM离心3-5分钟。
弃上清，用1-2mL培养液重悬MET-5A细胞。
按1:2比例将MET-5A细胞分到新培养瓶中。
添加6-8mL新鲜完全培养基。
后续传代可根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
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STR鉴定及相关
| Amelogenin | X,Y |
| CSF1PO | 10,12 |
| D2S1338 | 18,19 |
| D3S1358 | 17,18 |
| D5S818 | 12 |
| D7S820 | 10 |
| D8S1179 | 12,13 |
| D13S317 | 11,13 |
| D16S539 | 12 |
| D18S51 | 15,23 |
| D19S433 | 15 |
| D21S11 | 31.2 |
| FGA | 22,23 |
| Penta D | 10,11 |
| Penta E | 10,16 |
| TH01 | 6,9.3 |
| TPOX | 8 (ATCC=CRL-9444) |
| 8,11 (IZSLER=BS CL 214) | |
| vWA | 15,18 |